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SILAC蛋白質(zhì)組分析技術(shù)

實驗流程??
應(yīng)用領(lǐng)域
技術(shù)優(yōu)勢
細胞培養(yǎng)氨基酸穩(wěn)定同位素標記（Stable Isotope Labeling with Amino acids in Cell culture, SILAC），是2002年丹麥Mann實驗室對AACT技術(shù)作進一步改進而獲得，并開始應(yīng)用于定量蛋白質(zhì)組學研究，為**、系統(tǒng)地定性和定量分析復雜哺乳動物細胞蛋白質(zhì)組提供有效的解決方案。?

  • 疾病標志物篩選            
  • 作用機制研究
  • 藥物作用靶點研究        
  • 特殊功能蛋白質(zhì)篩選

  • 多個樣本混合后同時進行分離、酶切和鑒定，后續(xù)實驗對樣品的影響是一致的，減少了實驗操作和儀器設(shè)備引入的定量誤差；
  • 體內(nèi)標記技術(shù)，標記不受裂解液成分影響，效果穩(wěn)定，標記效率高達99%；
  • 可以對在DMEM、DMEM-F12、1640三種培養(yǎng)基中培養(yǎng)的多種細胞進行標記；
  • 靈敏度高，樣本量要求少。

技術(shù)原理

?SILAC的基本原理是分別用天然同位素（輕型）或穩(wěn)定同位素（重型）標記的必需氨基酸取代細胞培養(yǎng)基中相應(yīng)氨基酸，細胞經(jīng)>6個倍增周期后，穩(wěn)定同位素標記的氨基酸**摻入到細胞新合成的蛋白質(zhì)中取代了原有氨基酸。不同標記細胞的裂解蛋白按細胞數(shù)或蛋白量等比例混合，經(jīng)分離、純化后進行質(zhì)譜鑒定。