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技術(shù)原理
TMT試劑由三部分組成:質(zhì)量報(bào)告基團(tuán)、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化基團(tuán)和氨基反應(yīng)基團(tuán)。
質(zhì)量報(bào)告基團(tuán)有10種不同的分子量,質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化基團(tuán)也10有種不同的分子量,與不同的報(bào)告基團(tuán)搭配,能保證被標(biāo)記的不同來(lái)源的同一肽段在一級(jí)質(zhì)譜中具有相同的質(zhì)荷比;氨基反應(yīng)基團(tuán)能與肽段N端及賴氨酸側(cè)鏈氨基發(fā)生共價(jià)連接使肽段連上標(biāo)記。
一級(jí)質(zhì)譜中,任何一種TMT試劑標(biāo)記的不同樣品中的同一肽段表現(xiàn)出相同的質(zhì)荷比;二級(jí)質(zhì)譜中,可切割鍵(箭頭所指)斷裂釋放出TMT報(bào)告離子,在質(zhì)譜低質(zhì)量區(qū)產(chǎn)生了10個(gè)TMT報(bào)告離子峰,其強(qiáng)度反應(yīng)了該肽段在不同樣品中的相對(duì)表達(dá)量信息,另外二級(jí)質(zhì)譜中的肽段碎片離子峰質(zhì)荷比反應(yīng)了該肽段的序列信息;這些質(zhì)譜原始數(shù)據(jù)經(jīng)過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)檢索,可得到蛋白質(zhì)的定性和相對(duì)定量信息。
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