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iTRAQ（isobaric tags for relative and absolute quantitation）

iTRAQ（isobaric tags for relative and absolute quantitation）技術(shù)是一種多肽體外標(biāo)記技術(shù)。該技術(shù)采用4-plex或8-plex同位素的標(biāo)簽，通過(guò)特異性標(biāo)記多肽的氨基基團(tuán)，進(jìn)行LC-MS/MS分析，可同時(shí)比較多種不同樣本中蛋白質(zhì)的相對(duì)表達(dá)含量。??????????????
技術(shù)原理
應(yīng)用領(lǐng)域
技術(shù)優(yōu)勢(shì)

  • 各種脅迫、生理、病理?xiàng)l件下細(xì)胞、組織樣品中高通量蛋白表達(dá)譜分析
  • 各種物種的蛋白質(zhì)組草圖的構(gòu)建

實(shí)驗(yàn)流程??

  • iTRAQ 可于一次實(shí)驗(yàn)中同時(shí)標(biāo)記 4 至 8 個(gè)的樣品，操作簡(jiǎn)單快速，減少多次質(zhì)譜檢測(cè)中產(chǎn)生的系統(tǒng)誤差。適用于對(duì)多個(gè)樣品進(jìn)行高通量的檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)更加靈活。
  • iTRAQ 是在肽段水平上進(jìn)行的體外標(biāo)記，幾乎適用于所有類型的生物樣本。
  • 重現(xiàn)性好、靈敏度高、定性與定量可同時(shí)進(jìn)行。
  • 檢測(cè)限低，可檢測(cè)出低豐度蛋白。

iTRAQ試劑包括3個(gè)部分：報(bào)告基團(tuán)（report group）、平衡基團(tuán)（balance group）和肽反應(yīng)基團(tuán)（amine-specific reactive group）。報(bào)告基團(tuán)相對(duì)分子質(zhì)量為113-121Da(無(wú)120)，因此iTRAQ 試劑可同時(shí)標(biāo)記8 組樣品。平衡基團(tuán)相對(duì)分子質(zhì)量為192-184Da(無(wú)185)，使得八種iTRAQ試劑分子量均為305Da，保證標(biāo)記的同一肽段m/z 相同。 肽反應(yīng)基團(tuán)將iTRAQ試劑與肽段上賴氨酸及N端氨基酸殘基相連，在其上報(bào)告基團(tuán)通過(guò)平衡基團(tuán)與反應(yīng)基團(tuán)相連，形成等量異位標(biāo)簽。